双缩脲试剂检测蛋白质原理

双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物，将尿素加热到180度，则两分子尿素缩合成一分子双缩脲，并放出一分子氨。双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生红紫色络合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有很多和双缩脲结构相似的肽键，因此也能起双缩脲反应，形成红紫色络合物。

双缩脲试剂检测蛋白质原理

双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能够以一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。

紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。

此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差，不适合微量蛋白的测定。

双缩脲法测定蛋白质的优缺点

优点：双缩脲法测定蛋白质的测定范围是1-10mg蛋白质，操作简单、快捷。既适合手工操作，又适合自动化分析，重复性好、线性关系好，双缩脲试剂可以长期保存。

缺点：灵敏度差，测定范围窄，样品需要量大，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，因此它常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。

干扰测定的物质包括有：在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。

双缩脲试剂检测蛋白质原理步骤

双缩脲试剂的配制取10g氢氧化钠放入量筒中，加水至100mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中，配成质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液，瓶口塞上胶塞，贴上标签，写上试剂A。

取1g硫酸铜放入量筒中，加水至100mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中，配成质量浓度为0.01g/mL的硫酸铜溶液（蓝色）。

瓶口塞上胶塞，贴上标签，写上试剂B。检测蛋白质的特异性反应是与双缩脲试剂作用，产生紫色反应。

蛋白质的主要成分

蛋白质是由碳、氢、氧、氮等元素构成，20种不同的氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物。

蛋白质是一种大分子化合物，作为人体细胞和组织的重要部分，参与人体的各种生化反应，他主要是由碳、氢、氧、氮四种元素构成，大部分蛋白质还含有硫、磷元素，少部分蛋白质也含有铁、铜、锰等元素。

以上元素按照一定的顺序排列就会形成蛋白质的基本单位，也就是氨基酸，而20种不同类型的氨基酸通过肽键连接成长链，根据链的排列方式以及长短的不同，就形成了多种多样的蛋白质。

蛋白质的作用包括哪些

蛋白质的作用可分为动态功能如催化作用，以及结构功能如构成各种组织等。

1、动态功能：包括化学催化反应、物质代谢调控、血液凝固、免疫反应、肌肉收缩、基因表达调控等。

2、结构功能：可以提供结缔组织、骨的基质以及形成组织形态等。

蛋白质是生物体的重要组成成分，也是生命活动的基本物质基础，并且是生物体中含量最丰富的生物大分子，承担着各种各样的生物学功能。